Badrilla 開發(fā)了一種用于免疫測定校準的專有技術(shù)，可將常見的免疫測定平臺（蛋白質(zhì)印跡）升級為強大的定量平臺。定量免疫測定可用于有限數(shù)量的應(yīng)用（某些 ELISA 測定），但大多數(shù)免疫測定形式（蛋白質(zhì)印跡、免疫顯微鏡）中不存在定量免疫測定。研究人員希望盡可能以絕對化學(xué)單位準確、可重復(fù)地測量生物標志物。為了實現(xiàn)這一目標，Badrila 創(chuàng)建了一種專有的校準標準技術(shù)，將蛋白質(zhì)印跡升級為定量免疫測定，能夠檢測絕對化學(xué)單位（pmol/樣本或類似單位）的生物標志物濃度。這為快速開發(fā)感興趣的生物標志物的簡單定量測定提供了一條途徑。

這項技術(shù)是如何運作的？

高質(zhì)量校準標準品將特定免疫測定的表位特征整合到重組產(chǎn)品中，或者通過共價連接到支架上確定的反應(yīng)位點（本身是重組蛋白：b），或者通過制造為支架本身的延伸a）。這些制造方法允許根據(jù)需要摻入各種復(fù)雜的表位，從簡單的肽和磷酸肽到蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域。

可以快速生成所研究的生物標志物校準標準。此類校準標準可以以允許構(gòu)建校準曲線的濃度范圍并入測定中。這可用于高精度地確定生物標志物的絕對濃度。

在測試系統(tǒng)中，對 His6 表位校準標準品進行了兩次蛋白質(zhì)印跡分析。觀察到 55kDa 的單條帶，信號強度隨校準物上樣量的變化而變化 (4pmol – 0.125pmol)。

原始數(shù)據(jù)的密度測定允許構(gòu)建校準曲線，該校準曲線可以通過以高的精度一式三份檢查的三種校準物濃度輕松定義。使用校準曲線可以計算并行檢查的生物標志物的濃度。觀察到的濃度和絕對濃度的變化小于 10%。

哪些生物標志物可以校準？

· 線性肽表位

· 翻譯后修飾位點（磷酸化、糖化等）

· 半抗原（染料、藥物、代謝物）

· 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域

· 單個或多個表位，以及

· 上述的組合

通過協(xié)作發(fā)展

Badrilla 與利茲大學(xué)、利物浦大學(xué)和牛津大學(xué)的杰出學(xué)術(shù)團體合作開展了一項研發(fā)計劃。我們富有成效的協(xié)作方法使我們能夠：

· 采用定量質(zhì)譜法的基準定量蛋白質(zhì)印跡技術(shù)

· 將定量蛋白質(zhì)印跡與高通量蛋白質(zhì)印跡相結(jié)合，以實現(xiàn)更高的分析通量

· 探索新穎的制造技術(shù)（用于校準標準）以擴展該技術(shù)的多功能性。